常規PCR Kit （經(jīng)典法）(含Taq酶）

Venor® Gem Classic

特點(diǎn)

1.內控對照為獨立包裝，遵循歐洲藥典和日本藥典操作流程。

2.高特異性，僅一條陽(yáng)性對照條帶，即可涵蓋所有可能感染細胞的支原體物種。操作簡(jiǎn)單，

易于觀(guān)察。

3. 高靈敏度，若PCR反應體系加入10μl樣本，支原體檢測限度為≤5或≤10CFU。

(詳見(jiàn)下文“(2)Venor® Gem Classic Kit 10種常見(jiàn)支原體檢測限“)

4.歐洲藥典要求的26種支原體均可檢出。該試劑盒可檢測出1種脲原體、7種無(wú)膽甾原體和85種支原體，與細菌和真核DNA無(wú)交叉反應。

5.試劑盒內包含Taq酶，無(wú)需另外購買(mǎi)。

Venor® Gem Classic Kit

10種常見(jiàn)支原體檢測限

操作步驟

第1步：樣本處理

a. 細胞培養上清

b. 生物藥或需遵循藥典的樣本

說(shuō)明：①樣品基質(zhì)可能會(huì )影響檢測的靈敏度。收集和篩選更高的樣品量可提高測定靈敏度。

  ②細胞培養物樣本含豐富的DNA酶，在低溫下也能降解支原DNA，影響檢測靈敏度。

建議：樣本做DNA抽提處理，實(shí)現最高靈敏度。

推薦：德國MB公司生產(chǎn)的專(zhuān)用支原體DNA提取試劑盒Venor® Gem Sample Preparation Kit該DNA抽提試劑盒已經(jīng)過(guò)廣泛驗證。

第2步：試劑制備

第3步：PCR體系建立

a. 細胞培養上清

b. 生物藥或需遵循藥典的樣本

第4步：?jiǎn)?dòng)PCR反應

第5步：電泳結果分析

191bp為內控對照條帶，表明PCR反應正常。

當樣本存在支原體污染時(shí)，由于內控對照與支原體DNA存在競爭，內控對照條帶變弱（例如支原體DNA＞103拷貝）。

陽(yáng)性對照中支原體DNA＞104拷貝，內控對照條帶會(huì )*消失。

可能在80-90bp存在引物自退火形成的條帶，此條帶不影響檢測結果。

如果待測樣本對PCR產(chǎn)生抑制，則內控對照條帶變弱（和陰性對照相比），此時(shí)應先進(jìn)行DNA抽提（推薦使用：Venor® Gem Sample Preparation Kit 支原體DNA抽提試劑盒，詳見(jiàn)第25頁(yè)），然后再檢測。

儲存條件

2~8℃至少6個(gè)月。復溶后在-18℃保存。